Hibridização em Microarranjos (Microarray Hybridization)

Hibridização em Microarranjos (Microarray Hybridization)
MEDICINA
A hibridização de amostras de DNA-teste com sequências gênicas específicas imobilizadas em superfícies sólidas tornou-se uma ferramenta importante no estudo de expressão gênica, na análise filogenética e de polimorfismo de nucleotídeos. Um DNA-microarray (microarranjo de DNA) é uma coleção de pontos microscópios formados por sequências de DNA fixados em uma superfície sólida constituída de vidro, plástico ou silicone. Estes segmentos microscópicos são chamados de sondas. Milhares delas são ligadas ao suporte, formando um pequeno chip que será utilizado como plataforma para a realização de reações de hibridização que possibilitarão a detecção da sequência ou sequências-alvo no material analisado.

As sequências de DNA (ou cDNA) a serem analisadas são marcadas com corantes fluorescentes e colocadas para reagir com as sequências fixadas na superfície do microarranjo. Ao final, o sistema é lavado, as amostras não hibridizadas são removidas e a concentração de DNA é medida pela intensidade da emissão de fluorescência. Um ou dois fluoróforos são utilizados, dependendo da plataforma utilizada, sendo geralmente o Cy3 e Cy5 usados para marcar DNA. Os DNAs marcados são analisados num microarray scanner para a visualização da fluorescência após excitação com um raio laser de comprimento de onda definido.

A tecnologia de hibridização em microarranjos tem o potencial para permitir a detecção simultânea de múltiplas infecções causadas por diversos patógenos, viral ou não-viral. A primeira aplicação do método para diagnóstico na virologia foi para o sequenciamento do HIV, buscando mutações associadas à resistência às drogas antirretrovirais. Este ensaio foi muito útil também na caracterização do vírus da SARS (severe acute respiratory syndrome) como um novo coronavírus.

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